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日產(chǎn)Silvia怎么樣專家點評

日產(chǎn)Silvia怎么樣專家點評: 問提問者：網(wǎng)友 | 2018-08-08

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miRNA通過與轉(zhuǎn)錄本相互作用關(guān)閉或抑制基因表達近研究表明們影響了約三成基因miRNA多組織差異表達讓表達圖譜分析成研究重點同時miRNA過表達和抑制也近年來常用研究方法而 Peng Jin(埃默里大學(xué)) 我們使用RNA oligo和載體方法對于RNA oligo方法我們采用類似siRNA雙鏈miRNA及anti-miRNA來增加或阻斷特定miRNA活性種方法便于操控細胞培養(yǎng)特定miRNA活性載體方法有著長期改變優(yōu)勢能夠追蹤別細胞我們利用人工shRNA質(zhì)?；騊ol II表達載體來過表達特定miRNA對于miRNA下調(diào)我們要表達shRNA能產(chǎn)生與miRNA前體莖環(huán)結(jié)構(gòu)互補siRNA要使用miRNA海綿(miRNA sponge)能特定miRNA多目標(biāo)位點表達報告基因 Winston Kuo(哈佛大學(xué)) 目前有兩種通用策略:1) 基于載體或病毒miRNA或miRNA反義鏈序列過表達;2) 外源miRNA雙鏈或反義抑制劑轉(zhuǎn)染方法選擇取決于實驗設(shè)計般說來我們傾向于外源試劑轉(zhuǎn)染載體/病毒策略還依賴Drosha/Dicer酶對轉(zhuǎn)錄本順序加工且必須通過Exportin 5從核輸出人類癌細胞系曾報道過Drosha和Dicer水平miRNA加工缺陷此外Exportin 5也被認細胞和小鼠模型miRNA生物發(fā)生途徑瓶頸外源過表達飽和Exportin 5從而勝過內(nèi)源小RNA序列極端情況下會引起細胞或動物死亡外源雙鏈轉(zhuǎn)染直接進入RISC復(fù)合物因而繞過了些陷阱當(dāng)需要持久功能獲得或功能喪失時還需要載體或病毒穩(wěn)定表達穩(wěn)定細胞系必須小心地建立采用病毒滴度測定來避免上述問題 Joshua Mendell(約翰霍普金斯大學(xué)) 對于miRNA上調(diào)我們常常構(gòu)建表達載體制備起來非常簡單我們只擴增miRNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)及些側(cè)翼序列并直接克隆PCR產(chǎn)物有時候我們也用合成miRNA模擬物來瞬時轉(zhuǎn)染細胞過表達miRNA 了抑制miRNA我們般使用市場上反義寡核苷酸我們使用Dharmacon和Exiqon抑制劑都獲得了成功些試劑局限于們只能瞬時作用了實現(xiàn)穩(wěn)定抑制我們開始用所謂miRNA海綿們實際上有著多miRNA結(jié)合位點捕獲轉(zhuǎn)錄本能隔離細胞有活性miRNA Silvia Monticelli(瑞士生物醫(yī)學(xué)研究所) 我們主要使用慢病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)因我們主要研究原代細胞而且需要長時間持續(xù)表達取決于細胞類型我們也使用lipofectamine或Amaxa來瞬時轉(zhuǎn): 回答者：網(wǎng)友

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